前言类器官已成为生命科学和医学研究领域的“明星模型”，在疾病机制研究、药物筛选、精准医疗等方面展现出巨大潜力。然而，许多科研人员在尝试类器官培养时，常常面临“无法形成结构”、“细胞活性低”、“传代失败”等问题。探究其根本，培养体系中细胞因子的选择和配比可能是成败的关键！接下来，我们将结合类器官经典培养方案WENR（Wnt3a、EGF、Noggin、R-Spondins），解析“四大护法”如何各显神通，助你攻克类器官培养难关！

WENR何以成为类器官培养经典？

类器官的经典培养方案WENR（或称为WNER）最初由荷兰Hubrecht研究所的Hans Clevers团队开发，其核心成分包括Wnt-3a、EGF、Noggin和R-Spondins，常被称为类器官培养的“四大护法”。WENR方案在类器官的研究与实践中不断演化，通过与其他细胞因子或小分子抑制剂的巧妙结合，衍生出适用于多种类器官构建的培养条件。目前，WENR方案已在胃、小肠、结肠、胰腺、肝脏等多种类器官培养中得到广泛应用。

WENR“四大护法”介绍

1. Wnt-3a：干细胞增殖的“发动机”

Wnt-3a作为经典Wnt通路的激活剂，通过稳定β-catenin蛋白，启动下游靶基因（如c-Myc、CyclinD1），参与细胞发育、增殖和分化过程。研究显示，无论成体干细胞的组织来源如何，其衍生的类器官在增殖及维持干性方面，都依赖于经典的Wnt信号通路。在小鼠结肠类器官的建立过程中，添加外源性Wnt-3a对其增殖至关重要。

2. EGF：细胞增殖的“加速器”

表皮生长因子（EGF）与细胞受体结合，激活MAPK/ERK通路，促进细胞增殖和存活。EGF在胃肠道、肝脏、甲状腺等类器官的培养中被广泛应用，能够促进细胞集落形成和组织结构的稳定性。尽管EGF并非类器官形成的必需因子，但它能显著增加类器官的体积。

3. Noggin：抑制分化的“守门员”

Noggin是一种骨形态发生蛋白（BMP）的内源性抑制剂，能够通过阻断BMP与受体的结合，促进干细胞的增殖。通过协调Wnt与BMP信号通路的平衡，Noggin在类器官的生长和分化中起到了关键性作用。

4. R-Spondins：Wnt信号的“放大器”

R-spondin通过增强Wnt信号的表达，促进干细胞增殖和类器官结构形成。研究发现，缺乏R-spondin的类器官生长会受到显著限制。通过调节R-spondin的浓度，研究人员能够有效控制类器官的生长状态，实现有效的培养。

WENR培养的实战避坑Tips

Wnt-3a的浓度需要严格控制，因过度激活会导致类器官的结构紊乱。同时，R-spondin与Wnt-3a需协同使用，单独使用效果有限。建议根据类器官的类型优化Wnt-3a的浓度，一般为50-100ng/mL。在培养后期也可以进行动态调控。此外，EGF易被降解，建议使用无血清培养基，并且定期更换培养基以防止异常分化。

Noggin与Wnt-3a的联合使用是支持胃、肠道、肝脏等类器官长期培养的关键。在肝类器官的培养中，二者的协同作用确保了细胞的健康和增殖。为确保研究工作的顺利进行，可以常备品牌尊龙凯时的GMP级细胞因子，以提升实验效率。

最后，了解不同组织来源的类器官可能需要特异性的R-spondin亚型选择，同时，Wnt-3a和R-spondin的保存条件同样重要。通过以上研讨，相信在类器官培养的道路上，你会变得更加得心应手，创造出更多的科研成果。