尊龙凯时的类器官技术已成为生命科学和医学研究领域的“明星模型”，在疾病机制研究、药物筛选和精准医疗等方面展现出巨大的潜力。然而，众多科研人员在尝试类器官培养时，常常面临“未能形成结构”、“细胞活性不足”和“传代失败”等一系列问题。深入探讨这些问题的根本原因，培养体系中细胞因子的选择和配比是成功与否的关键。接下来，我们将结合类器官经典培养方案WENR（Wnt3a、EGF、Noggin和R-Spondins），分析这“四大护法”如何各显其能，助您顺利攻克类器官培养的难关！

WENR为何成为类器官培养的经典方案？

类器官的经典培养方案WENR，最初由荷兰Hubrecht研究所的Hans Clevers团队开发，其核心成分包括Wnt-3a、EGF、Noggin和R-Spondins，常被称为类器官培养的“四大护法”。WENR方案在类器官的研究和实践中不断演变，通过与其他细胞因子或小分子抑制剂的巧妙结合，衍生出适合多种类器官构建的培养条件。目前，WENR方案已在胃、小肠、结肠、胰腺、肝脏等多种类器官的培养中得到了广泛应用。

WENR的“四大护法”详解

1. Wnt-3a：干细胞增殖的“发动机”

Wnt-3a作为经典Wnt通路的激活剂，通过稳定β-catenin蛋白，启动下游靶基因（如c-Myc、CyclinD1），在细胞的发育、增殖和分化过程中发挥重要作用。研究表明，无论成体干细胞组织来源如何，其衍生的类器官在关键环节均依赖于经典的Wnt信号通路。Wnt-3a的外源性添加在小鼠结肠类器官的构建中至关重要，缺失后类器官将无法存活超过三天。

2. EGF：细胞增殖的“加速器”

表皮生长因子（EGF）通过与其受体结合，激活MAPK/ERK通路，促进细胞的增殖和存活。EGF的刺激能够增强上皮细胞的增殖、血管生成及分化，有助于类器官三维结构的形成。尽管EGF并非类器官形成的必要因子，但能够显著提高类器官的体积，尤其在胃肠道、肝脏等类器官的培养中发挥重要作用。

3. Noggin：抑制分化的“守门员”

在类器官的构建过程中，Noggin作为内源性抑制因子，通过阻断BMP与受体结合来促进干细胞的增殖，为类器官的形成提供充足细胞。同时，Noggin还能够维持干细胞的干性，并在细胞的命运决定和分化过程中起到重要的调控作用。它常与Wnt-3a和R-Spondins共同应用，以平衡BMP和Wnt信号，促使类器官的生长与分化。

4. R-Spondins：Wnt信号的“放大器”

R-spondin通过激活Wnt信号通路，增强其在多种组织中的表达，促进干细胞的增殖以及类器官结构的形成。研究显示，在缺乏R-spondin的情况下，类器官在4至5天后即停止生长，且不同浓度的R-spondin对类器官的生长状态有显著影响。合理的R-spondin浓度能够促进类器官的健康生长。

WENR实战建议与避坑指南

在使用WENR方案时，要注意Wnt过度激活可能导致类器官结构紊乱，因此Wnt-3a的浓度需严格控制，通常建议在50-100ng/mL之间，并在培养后期动态调控其浓度。此外，EGF容易被蛋白酶降解，建议使用无血清培养基，以避免诱导异常分化。Noggin与Wnt-3a协同作用，特别在胃、肠道和肝脏类器官的长期培养中不可或缺。遵循以上原则，可以显著提高类器官培养的成功率。尊龙凯时为您提供优质的细胞因子，以支持您在类器官研究中的探索与创新。