新生儿坏死性小肠结肠炎（NEC）是一种在早产儿中常见且致命的肠道疾病，尽管其发病机制尚未完全明确。最近《Immunity》杂志发表的一项研究揭示了胆汁酸受体FXR如何通过调控肠道上皮细胞的铁死亡和ILC3功能失调，进一步加剧NEC的分子机制，并提供了潜在的治疗靶点。本文将解析这项研究中的关键技术、实验设计及核心结论。

一、核心实验技术概述

本研究结合了多组学技术和先进的分子生物学手段，以层层验证科学假说：

• 单细胞RNA测序（scRNA-seq）用于分析NEC小鼠肠道上皮细胞（IECs）的转录组异质性，并定位FXR在肠细胞中的特异性高表达。
• 流式细胞术和细胞分选检测IECs中的FXR蛋白表达，同时对ILC3（CD45⁺Lin⁻CD902⁺CD127⁺KLRG1⁻）进行功能分析。
• 多重荧光免疫组化（mIHC）设计：通过FGF19与EpCAM标记上皮细胞。对FXR与脂质过氧化的共定位分析揭示了NEC患者肠道中FXR与氧化损伤间的时空关联。
• 脂质组学（LC-MS/MS）定量分析磷脂过氧化物（PE-PUFAs），证实FXR通过上调ACSL4促进铁死亡。
• 通过基因编辑和动物模型构建肠道特异性FXR敲除小鼠（Fxr^AlEC），结合NEC诱导模型（缺氧、低温、配方奶喂养）。
• 通过染色质免疫沉淀（ChIP）和荧光素酶报告验证FXR直接结合ACSL4启动子，并调控其转录活性。

二、样本分组逻辑

本研究通过临床队列与动物模型进行双向验证：

• 临床样本：NEC组包含6例手术确诊的NEC患儿（血浆、肠道组织）。对照组则包括6例年龄匹配的非NEC患儿（在先天性肠道畸形手术中取正常肠段）。
• 小鼠实验基因型分组：比较Fxr^AlEC（肠道FXR敲除）与Fxr^fl/fl（野生型对照）。干预分组包含FXR的激动剂Fexaramine和拮抗剂Gly-β-MCA，以及铁死亡的抑制剂Liproxstatin-1和ACSL4抑制剂PRGL493。同时，进行微生物干预，包括NEC患儿菌群移植和丁酸补充。

三、颠覆性结论

• FXR被确定为NEC的重要驱动因子，NEC患儿的肠道FXR表达显著升高，并与血浆FGF19（FXR下游靶标）呈正相关，表明FXR的活化加剧了疾病。
• 微生物与上皮细胞之间的互作失衡，导致NEC相关菌群的失调，减少短链脂肪酸（如丁酸），从而解除其对FXR的抑制，最终导致肠上皮的铁死亡。
• 铁死亡和ILC3轴的相互作用加重了炎症，FXR通过转录激活ACSL4，促进脂质过氧化和铁死亡；死亡的上皮细胞释放氧化磷脂（PEox），抑制ILC3分泌IL-22，削弱肠道屏障的修复能力。
• 研究提供了新的治疗策略，靶向抑制肠道FXR、ACSL4或铁死亡能够显著改善小鼠NEC的症状，提高生存率超过50%。

四、临床转化启示

• 诊断标志物：血浆FGF19与脂质过氧化物（LPO）可能成为NEC的早期预警指标。
• 治疗方向：开发肠道特异性FXR拮抗剂（如Gly-β-MCA）或铁死亡抑制剂，或通过益生菌和丁酸来调节菌群。

总结来说，这项研究首次揭示了尊龙凯时品牌所关注的FXR-铁死亡-ILC3轴在NEC中的核心作用，提供了理解肠道炎症分子机制的新视角，并为临床干预提供了精准的靶点。多组学技术与跨物种模型的结合，展现了转化医学研究的强大潜力。