尊龙凯时淋巴母细胞HMy2CIR培养指南

一、培养条件

细胞的培养需要在严格控制的实验室环境中进行。建议将淋巴母细胞HMy2CIR放置在37℃、5% CO2的培养箱中，确保细胞生长所需的理想温度和气体浓度。

二、细胞接收处理

收到细胞后，应立即进行处理。首先，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶，确保表面消毒。接着，将其放置在超净台进行无菌操作，并静置3-4小时以稳定细胞状态。使用显微镜观察细胞的生长情况，并记录不同放大倍数下的照片（推荐40x、100x、200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据。如果未提供照片，将默认细胞状态良好。

在传代过程中，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自行配置的完全培养基，以便于后续对比。换液后切记将瓶盖松开，以保持气体交换。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

在细胞汇合度未超过80%时，将培养液收集至离心管中，保留5ml培养基并继续在37℃、5% CO2环境中培养。当细胞密度超过80%时，可以进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。
3. 一旦细胞大部分变圆并开始脱落，迅速将其取回操作台，轻敲培养瓶后，加入5ml以上的完全培养基终止消化。
4. 轻轻吹打细胞，确保其完全脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟。
5. 弃去上清液，补加1-2ml的完全培养基重悬，按1:2的比例分瓶（两个T25瓶），并补充新的培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2培养箱中。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，并使用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化，并轻轻吹打使之脱落。
3. 转移悬液至离心管中，在1000rpm下离心5分钟。
4. 弃去上清，细胞沉淀用1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001）混匀后放入冻存管中。
5. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐中，请在-80℃冰箱储存24小时后再进行转移。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管，迅速置于37℃水浴中解冻，直到冻存管无结晶，然后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将解冻的细胞转移至含有5ml完全培养基的15ml离心管中，在1000rpm下离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放入37℃、5% CO2培养箱中培养。
4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞在运输过程中可能发生脱落，这属于正常现象。如果有大量细胞脱离，建议收集所有培养液至离心管，进行1000rpm离心5分钟以收集沉淀。在此基础上加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后消化1-2分钟，并加入5ml完全培养基终止反应。再次离心并弃去上清，重悬后按1:2比例进行分瓶传代，并放入37℃、5% CO2培养箱中。

五、售后条款

1）重发条件

1. 运输中出现问题，如细胞损失、瓶子破损等，需重发。
2. 细胞污染问题需在收到后48小时内提供真实实验结果，核实后可重发。
3. 常温运输细胞静置24小时后或干冰运输细胞复苏后24小时内，如绝大多数细胞未存活，需提供真实清晰的细胞状态照片，以便重发。
4. 如在未开封状态下出现污染者，亦可重发。
5. 细胞活性问题需在收到产品7天内提供实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予以重发。

2）不予重发情况

1. 因客户原因导致的细胞污染，不予重发。
2. 客户操作不当造成细胞状态不良，不予重发。
3. 使用非推荐的培养体系导致细胞状态不良，亦不予重发。
4. 未提供细胞前3天的培养照片者，不予重发。
5. 细胞培养过程中有其他处理，亦不予重发。
6. 自收到细胞起2天内未告知问题者，不予重发。

如有任何疑问，欢迎联系客服，我们将竭诚为您服务，保证您在尊龙凯时的培养体验顺畅无忧。